เนื้อหา

• คำสั่ง

เมื่อเข้าเรียนจุลชีววิทยาระดับที่สูงขึ้นคุณครูของคุณอาจต้องการให้คุณทำโครงงานที่คุณต้องระบุแบคทีเรียที่ไม่รู้จักผ่านชุดการทดสอบ ในการระบุแบคทีเรียนี้อย่างถูกต้องจำเป็นต้องมีอุปกรณ์ห้องปฏิบัติการที่เหมาะสมทั้งหมดและต้องรู้ขั้นตอนการปฏิบัติต่างๆในห้องปฏิบัติการ นอกจากนี้ยังมีประโยชน์ที่จะมีแผนภูมิการไหลของแบคทีเรียและการทดสอบในห้องปฏิบัติการเพื่อให้คุณสามารถระบุแบคทีเรียของคุณ

คำสั่ง

จานเพาะเชื้อช่วยให้แบคทีเรียถูกแยกออกเพื่อระบุลักษณะของพวกมันได้อย่างง่ายดาย (เทคโนโลยี Hemera / Photos.com / รูปภาพ Getty)

1. เตรียมการทดสอบทั้งหมดก่อนเริ่มการทดสอบ ซึ่งรวมถึงการเตรียมแผ่นและหลอดวุ้นตลอดจนการเตรียมตัวชี้วัดที่จำเป็นเช่นน้ำยาของ Kovac ติดฉลากหลอดและเพลตทั้งหมดอย่างเหมาะสมเพื่อไม่ให้ผสมกันจึงนำไปสู่ผลลัพธ์ที่ผิดพลาด

2. หว่านแบคทีเรียของคุณ วิธีนี้จะกำหนดรูปทรงและสีของแบคทีเรียของคุณเช่นกรัมบวก (สีม่วง) ลบกรัม (สีแดงหรือสีชมพู) มะพร้าว (วงกลม), spirochetes (เกลียว) หรือแท่ง ในการหว่านแบคทีเรียคุณจะต้องใช้ใบมีดที่สะอาดน้ำสีม่วงตกผลึกไอโอดีนสารฟอกขาวสาร Safranin กระดาษดูดซับกล้องจุลทรรศน์แสงและผ้าขนหนูกระดาษบางส่วน หลังจาก flambing ลูปใช้มันเพื่อวางหยดน้ำบนใบมีด ปัดห่วงอีกครั้งแล้ววางแบคทีเรียที่ไม่ทราบจำนวนเล็กน้อยลงในหยดน้ำ ส่งใบมีดไปบนเปลวไฟสองสามครั้งเพื่อทำให้แห้งและติดเชื้อแบคทีเรียอย่างเต็มที่กับใบมีด คลุมด้วยไวโอเล็ตตกผลึกทิ้งไว้หนึ่งนาทีแล้วค่อย ๆ ล้างออก จากนั้นปิดใบมีดด้วยไอโอดีน ทิ้งไว้ประมาณ 30 วินาทีแล้วล้างออก วางกระดาษดูดซับไว้บนใบมีดเพื่อกำจัดน้ำส่วนเกิน จากนั้นเทสารฟอกขาวลงบนใบมีด หลังจากห้าวินาทีล้างเพื่อลบสารฟอกขาว สุดท้ายปิดใบมีดด้วย Safranin หลังจาก 40 วินาทีให้ล้างใบมีดแล้วเช็ดให้แห้งด้วยกระดาษชำระเบา ๆ วางน้ำมันลงบนเว็บไซต์ของแบคทีเรียบนสไลด์และดูใต้กล้องจุลทรรศน์ สังเกตรูปร่างและสีของแบคทีเรียที่มองเห็นได้

   
   

3. ทดสอบ oxidase ในแบคทีเรียของคุณ สำหรับสิ่งนี้คุณจะต้องมีตัวกรองกระดาษสารรีเอเจนต์อี. คอไล Pseudomonas และแบคทีเรียที่ไม่รู้จัก ในการทดสอบนี้ E. coli และ Pseudomonas เป็นส่วนควบคุม แบคทีเรียของคุณควรมีอายุน้อยกว่า 24 ชั่วโมงสำหรับการทดสอบนี้ ปัดด้ามจับแล้ววางแบคทีเรียจำนวนเล็กน้อยลงบนแผ่นกรองกระดาษ ใช้หยดเพื่อวางหนึ่งรีเอเจนต์รีเอเจนต์ในแต่ละแบคทีเรีย หลังจากผ่านไป 10 วินาทีให้สังเกตสีของแบคทีเรียแต่ละตัว เชื้อ E. coli จะให้ผลเป็นบวกและ Pseudomonas จะให้ผลลบ แบคทีเรียที่เป็นบวกสำหรับเอนไซม์ไซโตโครมออกซิเดสจะกลายเป็นสีม่วงและแบคทีเรียที่เป็นลบจะไม่เปลี่ยนสี

4. ทดสอบไฮโดรเจนซัลไฟด์ (SIM) ปัดที่จับแล้วใช้เพื่อหยิบแบคทีเรียจากจาน ฉีดเชื้อแบคทีเรียด้วยซิมของคุณและปิดฝาหลอด ทิ้งหลอดนี้ไว้ในเตาอบนาน 18 ถึง 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส ระบุว่าแบคทีเรียของคุณเป็นมือถือหรือไม่ หากมีการเจริญเติบโตและมีเมฆมากห่างจากที่ที่คุณฉีดวัคซีนเชื้อแบคทีเรียจะเป็นมือถือ ถัดไปวางน้ำยา Kovac สองหยดลงในหลอด หากมีการเปลี่ยนสีเป็นสีแดงหรือสีชมพูแบคทีเรียนั้นจะเป็นบวกสำหรับการทดสอบนี้และมีทริปโตเฟนจึงเป็นผู้ผลิตอินโดล หากหลอดเปลี่ยนเป็นสีดำแสดงว่าแบคทีเรียกำลังผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์

   
   

5. ทำการทดสอบซิมมอนซิเตรต ฉีดเชื้อแบคทีเรียในหลอดทดลองสองหลอดด้วยวุ้นของ Simmon ทิ้งไว้ในเตาอบนาน 18 ถึง 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส วุ้นนั้นเริ่มแรกเป็นสีเขียว แต่ถ้าแบคทีเรียของคุณใช้ซิเตรตเป็นแหล่งคาร์บอนสีจะเปลี่ยนจากสีเขียวเป็นสีน้ำเงิน สีน้ำเงินเป็นผลบวก หากหลอดยังคงเป็นสีเขียวแบคทีเรียของพวกเขาจะเป็นลบสำหรับการใช้ซิเตรตเป็นแหล่งคาร์บอนเดียว

6. ทำการทดสอบเมทิลเรด (MRVP) สำหรับการทดสอบนี้คุณต้องใช้สองหลอดที่มีสารละลายของเปปโตนบัฟเฟอร์และเดกซ์โทรส (หรือกลูโคส) ฉีดวัคซีนแต่ละหลอดด้วยแบคทีเรียที่ไม่รู้จักและกลับไปที่เตาเป็นเวลา 18 ถึง 24 ชั่วโมงที่ 37 องศาเซลเซียส เมื่อพร้อมแล้วให้เติมเมทิลสีแดงสามหยดลงในหลอด นี่จะเป็นหลอด MR ของคุณ หากหลอดเปลี่ยนจากสีเหลืองเป็นสีแดงแบคทีเรียจะเป็นบวกและใช้เส้นทางผสมกรดระหว่างการหมัก (ผลิตกรดแลคติคอะซิติกและฟอร์มิก) ในหลอดที่สองเพิ่มรีพีเจนต์ VP สองหยด หากหลอดเปลี่ยนเป็นสีแดงแสดงว่าแบคทีเรียเป็นบวกสำหรับการก่อตัวของ diacetyl ซึ่งเป็นผลิตภัณฑ์หมัก หากหลอดเปลี่ยนเป็นสีน้ำตาลแสดงว่าแบคทีเรียของคุณติดลบ

7. ค้นหาแบคทีเรียของคุณโดยสังเกตผลบวกและลบในผังงาน