เนื้อหา

• คำสั่ง
• กำลังกู้คืนคอลัมน์
• เคล็ดลับ
• การเตือน
• สิ่งที่คุณต้องการ

โครมาโตกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง (HPLC) เป็นวิธีการทั่วไปของการวิเคราะห์ในห้องปฏิบัติการโดยตัวอย่างจะถูกแยกออกเป็นส่วนประกอบทางเคมีในขณะที่ผ่านคอลัมน์ คอลัมน์นี้เต็มไปด้วยวัสดุที่มีรูพรุนโดยทั่วไปจะมีซิลิกาเจล คอลัมน์ย้อนกลับมาตรฐานเช่น C8 บางครั้งสามารถอุดตันหรือกลายเป็นสิ่งปนเปื้อน คอลัมน์เหล่านี้สามารถดึงข้อมูลได้โดยใช้เทคนิคที่ง่ายมาก

คำสั่ง

ตัวทำละลายที่ถูกต้องสามารถกู้คืนคอลัมน์สกปรกได้ (Jupiterimages / liquidlibrary / Getty Images)

กำลังกู้คืนคอลัมน์

1. ปลดคอลัมน์และกลับตำแหน่งเพื่อให้เฟสเคลื่อนที่ตอนนี้ป้อนผ่านเอาต์พุตปกติของคอลัมน์ ติดตั้งเต้ารับที่ปลายอีกด้านหนึ่งของคอลัมน์ (ซึ่งเป็นรายการดั้งเดิม) แล้วปล่อยให้มันไหลออกมา

2. ปั๊มชุดตัวทำละลายตามลำดับเพื่อลดกระแสไฟฟ้า ชุดพื้นฐานที่แนะนำคือการเริ่มต้นด้วยเมทานอลจากนั้นเปลี่ยนเป็น acetonitrile จากนั้น acetonitrile / isopropanol (75:25), isopropanol, methylene คลอไรด์และเฮกเซน หากเฟสเคลื่อนที่ที่อยู่ในคอลัมน์ดูดซับได้แนะนำให้ใช้เส้นทางที่มีน้ำก่อนในเมทานอล การไหลของหนึ่งถึงสองมิลลิลิตรต่อนาทีนั้นเพียงพอและควรมีการสูบประมาณสิบคอลัมน์ของตัวทำละลายแต่ละตัว คอลัมน์ปริมาณคือพื้นที่ภายในของคอลัมน์และคำนวณโดย (0.7 x pi x (DI / 2) ^ 2 x L) โดยที่ DI คือเส้นผ่านศูนย์กลางด้านในของคอลัมน์และ L คือความยาว

   
   

3. ปั๊มไอโซโพรพานอลอีกสิบเล่มผ่านคอลัมน์เพื่อเตรียมไว้สำหรับใช้กับเฟสมือถือดั้งเดิม หากเฟสมือถือดั้งเดิมถูกกันกระแทกให้ปั๊มน้ำผ่านคอลัมน์หลังไอโซโพรพานอลก่อนกลับสู่เฟสมือถือดั้งเดิม

4. ปลดคอลัมน์กลับด้านและมีส่วนร่วมอีกครั้งเพื่อให้อยู่ในตำแหน่งเดิม (เพื่อให้เฟสที่เคลื่อนย้ายได้เข้าสู่ด้านขวาของคอลัมน์) เชื่อมต่อเอาท์พุทลำโพงเข้ากับเครื่องตรวจจับอีกครั้ง

เคล็ดลับ

• หากกระบวนการนี้ไม่ทำความสะอาดคอลัมน์อย่างละเอียดอาจใช้ส่วนผสมของไดเมทิลซัลฟอกไซด์ (DMSO) และไดเมทิลฟอร์มาไมด์ (DMF) ผสม 50:50 สิ่งตกค้างของโปรตีนและไอออนของโลหะอาจต้องใช้ตัวทำละลายชนิดอื่นเช่นรีเอเจนต์แบบประหยัดพลังงานหรือสารละลายของเอทิลีน diamine tetra-acetic acid (EDTA)

การเตือน

• ในเครื่องใช้บางชนิดกระดูกสันหลังจะมีตะแกรงโลหะหยาบเป็นทางเข้า ในกรณีนี้การคืนค่าคอลัมน์จะช่วยให้เฟสคงที่จะออกจากคอลัมน์และไม่แนะนำ ปรึกษาตัวแทนจำหน่ายของคุณหากคุณไม่แน่ใจ
• ตัวทำละลายที่ใช้ในกระบวนการนี้อาจเป็นพิษเมื่อกลืนกินและสูดดม ใช้ข้อควรระวังในห้องปฏิบัติการปกติเมื่อใช้งาน

สิ่งที่คุณต้องการ

• อุปกรณ์ HPLC
• น้ำ
• เมทิลแอลกอฮอล์
• acetonitrile
• isopropanol
• เมทิลีนคลอไรด์
• เฮกเซน